釀酒酵母感受態細胞的制備、轉化

接下來喆圖小編給大家講講釀酒酵母感受態細胞的制備方法：

（1）從YPD平板上挑取一個新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 ml YPD液體培養基，30℃，250 rpm 培養過夜。

（2）測定過夜培養物的OD600值為3.0~5.0之間。

（3）將10 ml YPD過夜培養物稀釋至OD600值為0.2~0.4。

（4）在28~30℃恒溫培養搖床中繼續培養3~6 hr，使其OD600值達到0.6~1.0。

（5）于室溫1500 g 離心5 min 收集酵母細胞，棄上清。

（6）用10 ml 洗液洗酵母細胞，隨后于室溫1500 g 離心5 min離 心收集細胞，棄上清。

（7）用1 ml TE/LiAc重懸酵母細胞，以每管50 μl 分裝。

接下來是釀酒酵母細胞的轉化

（1）取50 μl 感受態細胞，再加入待轉質粒各2 μl，混勻。

（2）加入500 μl 轉化用溶液（PEG/LiAc，二甲亞砜），彈擊管壁混勻。

（3）30℃恒溫培養搖床中恒溫1 h，隔15min彈擊管壁混勻。

（4）加入1毫升YPD培養液，30℃恒溫培養搖床中培養1小時。

（5）3500 g 離心5 min ，留沉淀，棄上清。

（6）沉淀用150 μl TE重懸，涂相應的SD平板放置在37℃恒溫培養箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實驗報告。觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。

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