miRNA定量檢測解讀

 　　miRNA定量檢測就是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關系，所以成為定量的依據。由于miRNA定量檢測的眾多優(yōu)點，現(xiàn)在已經是生命科學領域的一項重要技術，并成為基因表達差異和文章發(fā)表*的部分。miRNA定量檢測輸出的數據不同于常規(guī)PCR電泳檢測，很多沒有做過miRNA定量檢測的研究者常常感到高深莫測，不知從何入手；甚至一些做過一些實驗的研究者也會對數據處理分析感到迷惑。很多時候，盡管知曉qPCR的原理和基本操作，仍然浪費時間和精力，而得不到好的結果或對大量的數據不知所措。
　　上海基屹生物科技有限公司的miRNA定量檢測技術服務，根據實驗目的，設計實驗方案（相對定量或定量；SYBR Green I或Taqman探針方法），用*按照符合標準（MIQE）的miRNA定量檢測試劑完成實驗，提供符合文章發(fā)表的客觀事實實驗報告和原始數據。
　　miRNA定量檢測是 19~28 nt 的調控RNA分子，主要包括微 RNA（micro RNA，miRNA）和小干涉RNA(short interfering RNA，siRNA)兩類，其中的miRNAs成為繼 siRNAs之后新的研究熱點之一，名列2002年和2003年美國《科學》雜志評出的年度科學成就。
　　miRNA定量檢測中的miRNA是長片段RNA序列的一部分，同siRNAs一樣是比較短小的單鏈小分子RNA，一般來源于染色體的非編碼區(qū)域，由大約70 nt大小的可形成發(fā)夾結構的前體加工而來，miRNA定量檢測通過與其目標mRNA分子的3 端非編碼區(qū)域（3-untranslated region，3 UTR）互補導致該mRNA分子的翻譯受到抑制。
　　要了解miRNA在基因調控中扮演的角色，很關鍵的一個方法就是迅速、準確地定量檢測miRNA基因的表達。因此，miRNA定量檢測表達水平的檢測也成為了科學家們研究的熱點。但是由于小分子RNA是一類很小的分子，部分小分子RNA表達水平可能很低，因而需要極為靈敏而定量的分析工具。miRNA定量檢測常用的檢測方法有：
　　1.  Northern blotting
　　2.  核糖核酸酶保護分析以及基于此方法的液相雜交。
　　3.  RT-PCR也被用來miRNA定量檢測前體的表達水平， 其他基于PCR技術檢測miRNA的方法有引物延伸法，就是在引物的5 末端加一個特異標記，可以定量測定低豐度的RNA含量；原位雜交技術（CISH,FISH）可以方便的檢測miRNA的時空表達的差異。
　　4.  芯片(microarrays)技術[46,47]是一種較快的研究miRNA表達的方法。
　　miRNA定量檢測方法克服了由于miRNA分子太短（~22 nt）帶來的定量zui大難題而引入靶向特異性的反轉錄引物，該RT引物可以與成熟miRNA結合，形成反轉錄引物/成熟miRNA復合物，并在miRNA的5’末端延伸。這樣就得到一個較長的反轉錄擴增因子，為進一步做實時定量PCR提供了符合要求的摸板。